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    ELISA試劑盒(BA法)放大系統(tǒng)

    發(fā)布時間: 2015-09-28  點擊次數(shù): 2724次

    1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量測定的文章使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。
    應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中待測物質(zhì)水平。用純化的待測物質(zhì)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質(zhì),再與HRP標(biāo)記的待測物質(zhì)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,ELISA試劑盒經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的待測物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物質(zhì)濃度。
    BA-ELISA分為:
    1,LAB法即酶聯(lián)親和素-生物素標(biāo)記法(Labeledavidin-biotin,簡稱LAB)。用辣根過氧化物酶直接標(biāo)記親和素,用生物素標(biāo)記第二抗體。
    2,ABC法即酶聯(lián)親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法(Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex,簡稱ABC)。如用鏈霉親和素(Streptavidin),則形成鏈霉親和素-酶聯(lián)生物素復(fù)合物(Streptavidin-Biotin-PeroxidaesComplex,簡稱SABC)。在ABC法中,用生物素標(biāo)記第二抗體,ELISA試劑盒又用生物素標(biāo)記過氧化物酶。在使用前30min,親和素與酶聯(lián)生物素以1:1的比例混勻。1個親和素分子結(jié)合3個生物素分子,親和素剩下的1個結(jié)合點與標(biāo)記第二抗體的生物素結(jié)合,親和素起橋聯(lián)作用。ABC法比PAP(Peroxidase-antiperoxidasetech-nique)法敏感幾十倍。
    3,BAB法即酶聯(lián)親和素-生物素橋法(Bridgedavidin-biotin,簡稱BAB)。用游離親和素(或鏈霉親和素)作為橋聯(lián)劑,將生物素標(biāo)記后開成的復(fù)合物與酶標(biāo)記生物素連結(jié)起來,然后進(jìn)行樣品的檢測。由于標(biāo)記抗體分子上連有多個生物素,因此,ELISA試劑盒zui終形成的抗原-生物素標(biāo)記抗體-親和素-酶標(biāo)生物素復(fù)合物可積聚大量的酶分子;加入相應(yīng)底物后,產(chǎn)生強烈的酶促反應(yīng),大幅度提高檢測的靈敏度。
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